Ku celcelinta gaaban ee palindromic-ga ah ee si joogto ah loo kala qaybiyay (CRISPR) waa farsamo tafatir hidde-side ah oo jiilka saddexaad ah oo kacaan ku samaysay adduunka natiijooyinkeeda wax-soo-saarka sare leh. Waxaa loo isticmaalay in lagu daaweeyo cudurro bayooloji iyo caabuqyo kala duwan. Bakteeriyo kala duwan iyo prokaryotes kale (sida archaea) ayaa sidoo kale leh nidaamyada CRISPR/Cas9 si ay uga difaacaan phages-ka. Waxaa la soo sheegay in istaraatiijiyadaha ku salaysan CRISPR/Cas9 ay joojin karaan koritaanka iyo horumarka kansarka naasaha ee saddex-geesoodka ah (TNBC) iyagoo bartilmaameedsanaya hiddo-wadaha iska caabbinta ee isbeddeli kara, qoraalka, iyo nidaaminta epigenetic-ga. Faragelintan daaweynta ayaa laga yaabaa inay gacan ka geystaan wax ka qabashada dhibaatooyinka adag sida iska caabbinta daawada ee lagu arkay xitaa TNBC. Hadda, habab kala duwan ayaa loo isticmaalaa in lagu gaarsiiyo CRISPR/Cas9 bartilmaameedyada unugyada, sida jirka (durista microinjection, electroporation iyo hababka hydrodynamic), fayraska (fayraska la xiriira adeno iyo lentivirus) iyo kuwa aan fayraska ahayn (liposomes iyo nanoparticles lipid). )-particles). In kasta oo la sameeyay noocyo kala duwan si loo barto sababaha molecular-ka ee TNBC, la'aanta hababka xasaasiga ah iyo kuwa bartilmaameedka ah ee lagu bixinayo qalabka wax ka beddelka genome-ka ee vivo waxay xaddidaysaa codsigooda caafimaad. Marka la soo koobo, dib u eegistani waxay si buuxda u baareysaa horumarka, caqabadaha, xaddidaadaha, iyo rajada daaweynta CRISPR/Cas9 ee TNBC iyadoo lagu saleynayo caddaynta jirta. Waxaan sidoo kale iftiimineynaa sida isku-darka sirdoonka macmalka ah iyo barashada mashiinka ay u horumarin karto istaraatiijiyadaha CRISPR/Cas9 ee daaweynta TNBC.
Kansarka waxaa lagu gartaa qaybinta unugyada aan la xakamayn, carqaladaynta goobaha wareegga unugyada, iyo isbeddellada ku yimaada hiddo-wadaha xakamaynta burooyinka (TSGs) (Matthews et al., 2022). Noocyada kala duwan ee kansarka, kansarka naasuhu waa nooca ugu badan ee kansarka ee haweenka wuxuuna leeyahay heer dhimasho oo sarreeya adduunka oo dhan (Waks iyo Winer, 2019). Kansarka naasuhu waa cudur kala duwan oo leh astaamo kala duwan, sida astaamaha histological iyo bayoolojiga, soo bandhigidda kiliinikada iyo dhaqanka, iyo jawaabta daaweynta (Weigelt et al., 2010). Kala soocidda kansarka naasuhu waxay bixisaa aragtiyo sax ah oo ku saabsan ogaanshaha kansarka naaska iyo saadaasha burooyinka. Isticmaalka biomarkers-ka caadiga ah iyo astaamaha kiliinikada ayaa ahaa shuruudaha ugu muhiimsan ee kala soocidda kansarka naaska (Tsang iyo Tse, 2019). Saadaasha iyo jawaabta daaweynta kansarka naaska waxaa saameeya arrimo badan, oo ay ku jiraan joogitaanka soo-dhoweeyaha estrogen (ER), soo-dhoweeyaha progesterone (PR), soo-dhoweeyaha koritaanka epidermal-ka aadanaha 2 (HER2/neu), iyo heerka histological, nooca burooyinka, iyo heerka. cabbirka iyo metastasis-ka qanjidhada limfaha (Al-Tubaiti, 2020). Shan nooc oo molecular ah oo gudaha ah oo kansarka naasaha ah ayaa la aqoonsaday, oo ay ku jiraan luminal A, luminal B, HER2-enriched, basal-like, iyo claudin-low (Prat et al., 2015). TNBC waa nooc molecular ah oo kansar ah oo aan muujin dhammaan ER, PR, iyo HER2 (Yin et al., 2020). Astaamahan cudurka ah waxay la xiriiraan TNBC, iyagoo xaqiijinaya horumarkiisa degdegga ah iyo dabeecaddiisa ka gardarrada badan nooc kasta oo kale oo kansarka naasaha ah (Feng et al., 2018). Intaa waxaa dheer, Peru et al (2000) waxay isticmaaleen tignoolajiyada microarray si ay dib ugu kala saaraan kansarka naasaha una aqoonsadaan shan nooc oo gudaha ah oo kansarka naasaha ah (Cadenas, 2012). Kansarka naasaha oo u eg basal waa nooc ka mid ah kansarka naasaha oo leh phenotype saddex-taban ah wuxuuna la xiriiraa horumarka degdegga ah. Waa in la ogaadaa in dhammaan kansarrada naasaha ee u eg basal-ka si caadi ah loogu aqoonsado TNBC, laakiin 77% oo keliya ayaa ah TNBC; Taas bedelkeeda, 71–91% TNBC waa u eg basal-ka, taasoo muujinaysa in labada nooc ee kansarka naasuhu ay isku mid yihiin oo ay matalaan kala-soocid kala duwan (Wang D.-Y. et al., 2019). Tani waxay abuurtaa baahi loo qabo in lagu qeexo kala duwanaanshaha TNBC si loo caddeeyo saadaasha loona aqoonsado jawaabaha suurtagalka ah ee daaweynta hadda iyo mustaqbalka. Intaa waxaa dheer, TNBC waxay ka dhigan tahay 15–20% dhammaan kiisaska kansarka naasaha waxayna ku badan tahay haweenka da'doodu ka yar tahay 50 sano. Isbeddellada BRCA1 ama BRCA2 ayaa lagu soo warramey qiyaastii 20% kiisaska TNBC (Xie et al., 2017; Tzikas et al., 2017)., 2020). Daraasaduhu waxay sidoo kale muujiyeen in TNBC ay leedahay jawi difaac oo gaar ah oo ay ku jiraan heerar sare oo ah arrimaha koritaanka endothelial-ka xididdada dhiigga, macrophages-la xiriira burooyinka (TAMs), lymphocytes-ka burooyinka ku faafa (TILs), iyo molecules kale oo ku lug leh koritaanka burooyinka iyo socdaalka. Sidaa darteed, fahamka deegaanka yar ee TNBC waa mid muhiim u ah saadaalinteeda iyo daaweynta (Fan iyo He, 2022).
Si loo qiimeeyo saadaasha TNBC loona hubiyo daaweyn wax ku ool ah, ogaanshaha saxda ah, oo inta badan ku salaysan immunohistochemistry (IHC) si loo ogaado ER, PR iyo HER2, iyo baaritaanka naasaha si loo ogaado burooyinka naasaha, waa muhiim. Si kastaba ha ahaatee, baaritaanka naasaha si ku filan uma muujin karo astaamaha gudaha sida necrosis iyo fibrosis (Deepak Singh et al., 2021). Maadaama saadaasha iyo ogaanshaha liidata ay ka hortagayaan dhakhaatiirta inay qoraan daawooyinka saxda ah (Chaudhary, 2020), xeelado kala duwan ayaa loo isticmaalaa si loo horumariyo daryeelka bukaanada qaba TNBC. Hadda, laba daawo, doxorubicin iyo cyclophosphamide, ayaa loo isticmaalaa bukaanada qaba TNBC waxayna muujiyeen natiijooyin wanaagsan. Intaa waxaa dheer, daawooyinka kale ee platinum ayaa la isticmaalaa, sida carboplatin iyo cisplatin (Sikov et al., 2015). Intaa waxaa dheer, daawooyinka PARP sida Olaparib, Velaparib, iyo PF-01367338 ayaa loo isticmaalay sidii daawooyin kiimoterabiga ah oo suurtagal ah oo lagu daaweynayo TNBC (Ishino et al., 2018). Tan iyo markii la soo sheegay in waddooyinka calaamadaynta Wnt/b-Catenin, NOTCH, iyo Hedgehog ay ku lug leeyihiin dhacdooyinka iyo horumarka TNBC, bartilmaameedsiga daawooyinka waddooyinkan waxay noqon kartaa istaraatiijiyad muhiim ah (Aysola et al., 2013). Inkasta oo qalliinka, daaweynta shucaaca iyo kiimoterabiga ay yihiin udub-dhexaadka daaweynta TNBC maanta, horumar la taaban karo ayaa laga sameeyay horumarinta daaweyn cusub oo ay ku jiraan daaweynta la beegsanayo, daaweynta difaaca jirka, qalabyo kala duwan oo tafatirka hidda-wadaha la xiriira CRISPR sida Cas9n, dCas9., CRISPR/Cas12, tafatirka ugu horreeya, iyo daaweynta hidda-wadaha ee CRISPR/Cas9. Halkan waxaan diiradda saari doonnaa qalabyo kala duwan oo tafatirka hidda-wadaha la xiriira CRISPR oo loo isticmaalo daaweynta TNBC. Kuwaas ka mid ah, CRISPR/Cas9 waxay heshay fiiro gaar ah.
Cas9n, oo sidoo kale loo yaqaan Cas9 nickase, waa nooc hidde ahaan loo farsameeyay oo ka mid ah borotiinka Cas9 oo laga soo qaatay nidaamka tafatirka hiddo-wadaha CRISPR/Cas9 (Gupta et al., 2019). Qaabkiisii asalka ahaa, borotiinka Cas9 wuxuu ka kooban yahay laba qaybood oo nuclease ah: RuvC iyo HNH, oo shaqada ugu weyn ay tahay kala-goynta labada qaybood ee DNA-da. Si kastaba ha ahaatee, Cas9n, mid ka mid ah qaybaha nuclease-ka, HNH, ayaa hidde ahaan isbeddela oo noqda mid aan firfircoonayn. Sidaa darteed, qaybta HNH ee Cas9n waxay weli tahay mid aan shaqaynayn. Kaliya qaybta RuvC ayaa weli firfircoon, taasoo u oggolaanaysa Cas9n inay jarto ama abuurto jabitaanno ku dhaca hal qaybood oo DNA ah (Trevino iyo Zhang, 2014). Marka la barbardhigo Cas9, Cas9n waxay si wax ku ool ah u yarayn kartaa saamaynta ka baxsan bartilmaameedka waxayna si sax ah u hagaajin kartaa farsamooyinka dayactirka unugyada. Cas9n waxaa loo isticmaali karaa in lagu xalliyo dhibaatooyin kala duwan, sida abuurista jabitaanno meelo gaar ah oo ku yaal DNA laba-xarig leh. Ujeedadaas awgeed, laba molecules Cas9n ayaa la isku daray oo la wada isticmaalay (Yee, 2016). Kinase isku dhafan oo ah kinase 3 (MLK3) waa kinase borotiin ah oo firfircoon oo mitogen ah kaasoo u adeega sidii nidaamiye muhiim ah inta lagu jiro metastasis-ka TNBC (Cronan et al., 2012).
MLK3 waxay dhaqaajin kartaa waddooyin badan oo calaamadayn ah oo horseedaya metastasis-ka TNBC. Tusaale ahaan, waddada c-Jun N-terminal kinase (JNK) waxay nidaamisaa dhaqdhaqaaqa unugyada iyo burburka matrix-ka ka baxsan unugyada, MLK3-na waxay dhaqaajisaa waddada JNK, taasoo kor u qaadaysa dhaqdhaqaaqa unugyada waxayna keentaa sifooyin duullaan ah (Rattanasinchai iyo Gallo, 2016). MLK3 sidoo kale waxay xakameysaa EMT. Si taas loo sameeyo, waxay dhaqaajisaa arrimaha qoraalka hoose sida Snail, Slug iyo Twist. Arrimahani waxay joojiyaan muujinta calaamadaha epithelial waxayna kor u qaadaan muujinta calaamadaha mesenchymal, taasoo horseedaysa helitaanka nooc metastatic ah (Casino et al., 2023). MLK3 waxaa la arkay inay door ka ciyaarto dib-u-habaynta ECM iyo kicinta borotiinnada sida matrix metalloproteinases (MMPs) kuwaas oo burburiya ECM. Tani waxay sahlaysaa duullaanka unugyada burooyinka waxayna ku faaftaa goobo fog (Katari et al., 2019). Sidaa darteed, daraasado hore ayaa muujiyay in MLK3 ay door muhiim ah ka ciyaarto TNBC. Rattanasinchai iyo Gallo waxay isticmaaleen moodooyinka TNBC si ay u bartaan doorka MLK3 waxayna ogaadeen inay kor u qaaddo horumarinta kansarka iyada oo loo marayo marinno gaar ah oo calaamadayn ah. Waxay isticmaaleen CRISPR/Cas9n si ay u tafatiraan MLK3 waxayna arkeen hoos u dhac weyn oo ku yimid metastasis-ka TNBC (Rattanasinchai iyo Gallo, 2016).
dCas9, oo badanaa loo yaqaan Cas9 aan firfircoonayn, waa qaab wax laga beddelay oo ka soo jeeda borotiinka Cas9. Si ka duwan Cas9 firfircoon, dCas9 ma laha firfircooni endonuclease ah, taasoo ka dhigaysa mid aan awoodin inuu kiciyo jabka laba-xiddigle ee DNA. Sidaa darteed, dCas9 waxaa loo isticmaali karaa in si sax ah loogu bartilmaameedsado gobollada gaarka ah ee hidde-sideyaasha iyada oo aan wax isbeddel ah ama wax ka beddelin taxanaha DNA-da (Wang et al., 2016). DCas9, laba borotiin oo endonuclease ah, RuvC iyo HNH, ayaa la joojiyaa iyadoo la xakameynayo haraaga amino acid ee muhiimka ah. (Richter et al., 2016). Iyadoo aysan jirin wax dhaqdhaqaaq ah oo kala-goynta DNA-da ah, dCas9 waxay door muhiim ah ka ciyaartaa cilmi-baarista hidde-sideyaasha iyo bayotechnoolajiyadda. Tusaale ahaan, waxay u oggolaanaysaa muuqaalka gobollada gaarka ah ee hidde-sideyaasha, waxay fududeysaa nidaaminta qoraalka, waxayna kor u qaaddaa wax-ka-beddelka epigenetic-ga (Brocken et al., 2018).
Qodobka qoraalka ZEB1 (finger E-box oo ku xidhan homeobox 1) wuxuu door gaar ah oo muhiim ah ka ciyaaraa dhexdhexaadinta kala-guurka epithelial-mesenchymal (EMT), oo ah geedi socod unug oo dhaca inta lagu jiro horumarka embriyaha, dayactirka unugyada, iyo horumarka kansarka. Waxay ku lug leedahay isbeddelka unugyada epithelial una beddelaan unugyada mesenchymal, taasoo keenta isbeddello ku yimaada qaab-dhismeedka unugyada, dhaqdhaqaaqa, duullaanka, iwm. (Wu et al., 2020). ZEB1 wuxuu joojiyaa calaamado badan oo epithelial ah, sida E-cadherin iyo Occludin, kuwaas oo mas'uul ka ah ilaalinta isku-xidhka unugyada iyo kala-goynta unugyada epithelial ee TNBC (Moreno-Bueno et al., 2008). Intaa waxaa dheer, ZEB1 wuxuu dhaqaajiyaa calaamado gaar ah sida N-cadherin, vimentin iyo fibronectin (Konradi et al., 2014) wuxuuna sidoo kale xakameeyaa hiddo-sidayaasha ku lug leh dib-u-habaynta cytoskeletal sida Rho GTPases iyo matrix metalloproteinases (MMPs) (Huang). et al., 2014). 2022), marka lagu daro, waxay sidoo kale saamaysaa waddooyin kala duwan oo calaamadayn ah sida isbeddelka koritaanka-β (TGF-β), calaamadaynta Wnt, iwm., taasoo kor u qaadaysa duullaanka burooyinka iyo metastasis-ka TNBC (Chen et al., 2016).). Daraasado badan iyo caddayn cilmiyeed ayaa tilmaamaya in ZEB1 uu leeyahay awood weyn oo ah wakiil qiimo leh oo loogu talagalay ogaanshaha iyo faragelinta daaweynta ee TNBC. Daraasad dhowaan la sameeyay, Waryah et al. waxay isticmaaleen qaab TNBC ah waxayna ku guuleysteen xakamaynta buuxda ee ZEB1 by dCas9. Sidaa darteed, waxay arkeen gaar ahaansho aad u sarreysa iyo ku dhawaad dhammaystiran oo ah joojinta ZEB1 xaaladaha in vivo (Waryah et al., 2023).
CRISPR/Cas12 waa qalab wax ka beddela hidda-wadaha oo loo yaqaan CRISPR/Cpf1. Waxaa laga soo qaatay nidaamka CRISPR/Cas, halkaas oo ereyga Cas12 uu tilmaamayo borotiinka la xiriira CRISPR 12 (Bharathkumar et al., 2022), kaas oo gebi ahaanba la mid ah Cas9. Farqiga kaliya ayaa ah inuu ka kooban yahay borotiinka Cas12. Marka la barbardhigo Cas9, Cas12 wuxuu leeyahay shaqooyin gaar ah sida soo saarista darafyo dhegdheg leh inta lagu jiro habka tafatirka hidda-wadaha, halka Cas9 uu abuuro darafyo qallafsan (Wang et al., 2021). Sifadan Cas12 waxay gacan ka geysataa tignoolajiyada gaarka ah ee wax ka beddelka DNA-da. Maadaama uu yahay borotiin awood u leh inuu si sax ah u aqoonsado oo uu u jaro DNA-da bartilmaameedka ah, wuxuu leeyahay kala duwanaansho aan caadi ahayn, taasoo ka dhigaysa qalab wax ku ool ah oo loogu talagalay codsiyo kala duwan, oo ay ku jiraan tafatirka hidda-wadaha (Pickar-Oliver iyo Gersbach, 2019).
Sida noocyada kale ee CRISPR, CRISPR/Cas12 sidoo kale waxay awood u leedahay inay baabi'iso ama kiciso hiddo-sideyaasha TNBC, iyadoo beegsanaysa hiddo-sideyaasha door muhiim ah ka ciyaara cudur-sidaha ama jawaab celinta daaweynta (Yang iyo Zhang, 2023). Si loo dhammeeyo hawshan, waxaa la sameeyay hage RNA (gRNA) oo hagaya Cas12 hiddo-sideyaasha bartilmaameedka ah. Marka Cas12 uu ku xidhmo bartilmaameedkiisa, wuxuu soo bandhigayaa jab laba-xadhig ah oo DNA ah wuxuuna dhaqaajiyaa farsamooyinka dayactirka DNA-da. Inta lagu jiro habka dayactirka, nucleotides-ka khaldan ayaa la isku dari karaa, taasoo horseedaysa isbeddellada hiddo-sideyaasha iyo luminta shaqada (Zhang et al., 2021a). Intaa waxaa dheer, nooc la hagaajiyay oo ah enzyme-ka Cas12 (oo loo yaqaan dCas12) ayaa sidoo kale loo isticmaalay in lagu dhaqaajiyo hiddo-sideyaasha. Iyadoo lagu darayo firfircooni qoraal ah, waxaa suurtagal ah in la kiciyo hiddo-sideyaal gaar ah, sidaas darteedna la dhaqaajiyo. Tiknoolajiyaddani waxay leedahay awood weyn oo lagu dhiirrigelinayo kicinta hiddo-sideyaasha xakamaynta burooyinka (Sultan et al., 2022).
Tafatirka Prime waa tignoolajiyad cusub oo aad u horumarsan oo tafatirka genome-ka ah. Waxay awood u leedahay inay si sax ah wax uga beddesho DNA-da noole (Chen iyo Liu, 2023). Tafatirka Prime waxaa lagu gaaraa isku-darka laba qaybood oo waaweyn: ensaym CRISPR/Cas9 oo wax laga beddelay iyo transcriptase dib u celi ah. Doorka ensaym-ka CRISPR/Cas9 waa in si xulasho ah loo bartilmaameedsado goobaha saxda ah ee genome-ka, halka transcriptase dib u celi ah uu gacan ka geysto in si buuxda loo beddelo DNA-da goobta bartilmaameedka ah (Hassan et al., 2021). Habka tafatirka primer-ka, tallaabada ugu horreysa waxay ku lug leedahay abuurista hagaha tafatirka primer-ka RNA (pegRNA) (Standage-Beier et al., 2021). Waxay ka kooban tahay taxanaha bartilmaameedka iyo qaab-dhismeedka RNA ee u dhigma goobta tafatirka ee la doonayo ee DNA-da bartilmaameedka ah. PegRNA waxaa markaa lagu soo bandhigayaa unugyada bartilmaameedka ah iyadoo lala socdo nuclease tafatirka primer-ka (PE2). PE2 waa borotiin isku-dhafan oo ka kooban ensaym Cas9 ah, transcriptase dib u celi ah, iyo adaptor tafatirka primer-ka ah (Martín-Alonso et al., 2021). Gudaha unugga, isku-dhafka pegRNA iyo PE2 waxay raadiyaan DNA-da gaarka ah ee ay rabaan inay wax ka beddelaan. Ensaymka Cas9 wuxuu jarayaa DNA wuxuuna abuuraa template ka kooban hal xarig (Choi et al., 2022). Dib-u-eegista transcriptase wuxuu adeegsadaa template-kan si uu u diyaariyo DNA-da si wax looga beddelo. Marka lagu daro nuqulinta DNA-da, tilmaamaha wax ka beddelka template-ka RNA ayaa sidoo kale lagu daray. Ugu dambeyntii, xarigga DNA-da ee cusub ee la sameeyay waxaa loo isticmaalaa template si loo hagaajiyo jabka DNA-da, taasoo keentay taxane DNA oo isbeddelay oo ka kooban wax ka beddelka la rabo (Ochoa-Sanchez et al., 2021). Farsamooyinka wax ka beddelka Primer-ka waxay horseedi karaan isbeddello baahsan oo ku dhaca hiddo-sideyaasha. Waxay beegsan kartaa isbeddellada dhibcaha, gelinta, tirtirka, iyo xitaa beddelka hidda-wadaha (Anzalone et al., 2019; Chen iyo Liu, 2023). Tafatirka Prime wuxuu bixiyaa faa'iidooyin dhowr ah oo ka badan teknoolojiyada wax ka beddelka hidda-wadaha ee hore. Kuwaas waxaa ka mid ah saxnaanta kordhay, saameynta la dhimay ee ka baxsan bartilmaameedka, iyo awoodda wax ka beddelka DNA-da iyada oo aan lagu tiirsanayn jabka laba-xiddigle ee DNA (Anzalone et al., 2020).
Tiknoolajiyadda CRISPR/Cas9 waxaa markii hore loo sameeyay si looga ilaaliyo bakteeriyada gudbinta plasmid iyo caabuqa phage-ka, ka dibna waxaa loo isticmaalay qalab wax ku ool ah oo lagu bartilmaameedsado DNA-da ku salaysan RNA si loogu tafatiro hidde-sideyaasha (Jiang iyo Doudna, 2017). Intaa waxaa dheer, nidaamka CRISPR/Cas9 ayaa la soo sheegay inuu ku jiro 50% iyo 87% hidde-sideyaasha bakteeriyada iyo kuwa qadiimiga ah, siday u kala horreeyaan (Ishino et al., 2018). CRISPR/Cas9 waa qalab suurtagal ah oo loogu talagalay tirtirka, gelinta iyo sixitaanka taxane kasta oo hidde-side ah oo aan caadi ahayn iyadoo la adeegsanayo qaababka in vivo iyo in vitro (Sabit et al., 2021). Intaa waxaa dheer, CRISPR/Cas9 waxaa la muujiyay inay qayb ka tahay nidaamka difaaca jirka ee la qabsiga sababtoo ah gaar ahaanshihiisa hiddo-sideyaasha bartilmaameedka ah ee xiisaha leh (Chen iyo Zhang, 2018).
CRISPR/Cas9 wuxuu ka kooban yahay Cas9 iyo hal hage RNA (sgRNA). Cas9 waa endonuclease oo ka kooban qaybo badan oo borotiin ah. Intaa waxaa dheer, Cas9 wuxuu leeyahay sifooyin qaab-dhismeed iyo qaab-dhismeed gaar ah (Pacesa et al., 2022) maadaama uu ka kooban yahay laba lobes: aqoonsi (REC) iyo nuclease (NUC). Lobe-ka REC waxaa loo sii qaybiyaa saddex gobol: REC1, REC2, iyo helices buundo (Cromwell et al., 2018). NUC wuxuu ka kooban yahay saddex lobes, kuwaas oo kala ah RuvC (RuvC I, RuvC II, RuvC III), HNH iyo domainka isdhexgalka protospacer ee ku xiga motif (PAM) (Jaantuska 1) (Song et al., 2016). sgRNA wuxuu ka kooban yahay laba qaybood, oo ay ku jiraan CRISPR RNA (crRNA) iyo RNA yar oo beddela codeynta (RNA-ga raadraaca) (Jaantuska 1). SgRNA waxay isku xirtaa borotiinka Cas9 isku xira si ay u sameyso isku-dhafan firfircoon, oo sidoo kale loo yaqaan isku-dhafka saamaynta (Richter et al., 2012). crRNA waa lammaane saldhig nucleotide ah oo 18-20 ah kaasoo door muhiim ah ka ciyaara aqoonsashada taxanaha DNA-da bartilmaameedka ah. Intaa waxaa dheer, crRNA waxay lammaane la tahay DNA-da bartilmaameedka ah, tracrRNA-na waxay u dhaqantaa sidii saldhig u ah nuclease-ka Cas9 si ay ugu xidho DNA-da bartilmaameedka ah (Manghwar et al., 2019). Dhanka kale, taxanaha PAM wuxuu leeyahay 3 nucleotide, kaas oo xaqiijinaya, qeexaya oo dhexdhexaadinaya isku-xidhka isku-dhafka saamaynta leh ee DNA-da. Qaybaha isku-dhafka borotiinka Cas9 ee RuvC iyo HNH waxay leeyihiin dhaqdhaqaaq katalytic ah (Richter et al., 2012; Asmamaw iyo Zawdie, 2021). Qaybta nuclease-ka HNH ee qaybta hoose ee Cas9 waxay kala saartaa xarigga DNA-da ee la xiriira crRNA. Xudunta nuclease-ka RuvC waxay kala saartaa xadhkaha kale ee DNA-da waxayna soo saartaa jab laba-xadhigle ah (DSBs), ka dibna laba hab oo kala duwan oo lagu hagaajiyo jabka DNA-da ayaa la hawlgeliyaa (Jiang iyo Doudna, 2017) (Jaantuska 1).
Jaantuska 1. Dulmar guud oo ku saabsan CRISPR/Cas9 (A). Qaybaha nidaamka CRISPR/Cas9: (i). Cas9 endonuclease ayaa mas'uul ka ah jarista taxanaha DNA-da ee bartilmaameedka ah, (ii) hal hage (sg) RNA oo ka dhasha isku-darka crRNA iyo chimeras tra-crRNA. (laba). Cas9 waxaa ku jira dhowr qaybood sida Rec I, Rec II, NUC lobe (HNH iyo Ruv C waa qaybo hoose) iyo domainka isdhexgalka PAM (C) oo leh hawlo u dhigma. Isku-dhafka borotiinka CRISPR/Cas9 wuxuu u kala qaybiyaa taxanaha DNA qaabab aan dhammaystirnayn iyo kuwo dhammaystiran (D). CRISPR/Cas9 wuxuu wax ka beddelaa hidde-sidaha saddex marxaladood: aqoonsashada, jarista iyo hagaajinta. sg-RNA ee loogu talagalay ayaa hagta Cas9 waxayna aqoonsataa taxanaha la doonayo iyada oo loo marayo qaybta isku-dhafka ah ee crRNA. Cas9 wuxuu aqoonsan yahay taxanaha PAM ee 5′-NGG-3′ wuxuuna dhalaaliyaa DNA-da, isagoo samaynaya isku-dhafka DNA-RNA wuxuuna kicinayaa kala-goynta. Qaybta HNH ee Cas9 waxay kala saartaa xargaha is-waafajinta, qaybta RuvC-na waxay kala saartaa xargaha aan is-waafajinta lahayn. CRISPR/Cas9 waxay hagaajisaa dsDNA iyadoo u kala jabinaysa laba siyaabood: isku-xidhka dhammaadka aan is-waafajinta lahayn (NHEJ) iyo dayactirka isku-waafajinta isku-waafajinta ah (HDR). NHEJ waxay hagaajisaa DNA-da laba-laaban ee la'aanta DNA-da isku-waafajinta ah ee shisheeye iyada oo loo marayo habka enzymatic, oo ah farsamo khaladaad u nugul oo gelin karta ama ka saari karta taxanaha DNA-da ee aan kala sooca lahayn. HDR aad buu u gaar yahay wuxuuna u baahan yahay qaabab DNA oo isku-waafajin ah.
Wadooyinka dayactirka ee CRISPR/Cas9 dhexdhexaadinayaan waxaa ka mid ah isku-xidhka dhammaadka aan isku midka ahayn (NHEJ) iyo farsamooyinka dayactirka ee isku midka ah (HDR). NHEJ waa waddo u nugul khaladaadka sababtoo ah waxay ku lug leedahay gelinta ama tirtirka mana u baahna wax qaab ah inta lagu jiro habka dayactirka. Waxay isticmaashaa nucleotides aan kala sooc lahayn si ay u soo saarto borotiinno caadi ah (Abbasi et al., 2021). Nidaamkan dayactirka wuxuu ka kooban yahay afar isku-dhafan sida isku-dhafka KU, isku-dhafka borotiinka ee isku-dhafan nooca 4 (XRCC-4), enzyme-ka farsamaynta dhammaadka DNA, iyo kinase protein DNA-PKcs (Abbasi et al., 2021). Borotiinka isku dhafan ee KU wuxuu leeyahay laba unug oo hoosaad ah, Ku 70 iyo Ku 80, wuxuuna door muhiim ah ka ciyaaraa habka NHEJ, maadaama habka dayactirka uu bilaabo isku xidhka laba unug oo hoosaad ah (Ku 70 iyo Ku 80) dhinacyada khafiifka ah ama ku dhawaad cad ee DNA-da bartilmaameedka ah (Abbasi et al., 2021), isagoo u adeegaya sidii qalab lagu qoro arrimo kale oo la xiriira NHEJ goobta dhaawaca (Yang et al., 2020). XRCC-4 iyo ligase DNA waxay ka kooban yihiin 334 iyo 911 amino acids, siday u kala horreeyaan, isku-dhafka ligase IV ee XRCC4-DNA wuxuu kiciyaa isku-xidhka dhammaadka DNA-da (Chatterjee et al., 2015). Ensaymka farsamaynta dhammaadka DNA-da, oo sidoo kale loo yaqaan polynucleotide kinase 3′-phosphate, waa ensaym farsamaynta dhammaadka DNA-da. Waxay ka saari kartaa kooxda 3′P ee DNA-da waxayna fosfoorasayn kartaa kooxda 5′OH inta lagu jiro dayactirka DSB. Waxa kale oo ay ku lug leedahay hagaajinta jabka hal-xariiqle (SSBs) iyadoo la adeegsanayo marinka dayactirka SSB (Chatterjee et al., 2015). Kinase protein DNA-PKcs waa kinase borotiin ku tiirsan DNA kaas oo ka kooban qayb ka mid ah PIKKs (kinases la xiriira phosphatidylinositol 3-kinase) iyo qoyska ataxia telangiectasia mutated (ATM), iyo sidoo kale ATM iyo ATRs la xiriira Rad3. jabka xarigga (DSBs) iyo jabka hal-xariiqle (Yue et al., 2020; Peng et al., 2016).
HDR waa farsamo dayactir oo sax ah oo ku habboon sababtoo ah macluumaadka waxaa lagu koobi gareeyaa qaabka aan kala go 'lahayn ee duplex DNA-da isku midka ah, inkastoo ay u baahan tahay jiritaanka chromatids-ka walaalaha ah. Tani waxay dhacdaa inta lagu jiro marxaladda S/G2 ee wareegga unugyada naasleyda. HDR waxay inta badan ku dhacdaa noocyada khamiirka, laakiin NHEJ waxay muhiim u tahay naasleyda (Burma et al., 2006; Abbasi et al., 2021). Habka dayactirka oo dhammaystiran waxaa lagu muujiyay Jaantuska 1.
Maadaama TNBC ay sababto cilladaha hidde-sideyaasha iyo epigenetic-ga, sixitaanka cilladaha hidde-sideyaasha/epigogenomic-ga ee malignant iyadoo la adeegsanayo CRISPR/Cas9 waxay noqon kartaa hab daaweyn oo macquul ah (Chen et al., 2019). Intaa waxaa dheer, qaar ka mid ah arrimaha qoraalka ee ku lug leh nidaaminta qoraalka gaarka ah ee unugyada ayaa laga yaabaa inay muujiyaan astaamo gaar ah oo unugyada kansarka ah, taasoo soo jeedinaysa in nidaaminta qoraalka ay noqon karto hab aad u fiican oo loogu talagalay daaweynta kansarka (Drost et al., 2017). Ka faa'iidaysiga sifooyinkan molecular-ka ee burooyinka, sida cilladaha hidde-sideyaasha, epigenetic-ga iyo qoraalka, ee horumarinta daawada waxay hagaajin kartaa natiijooyinka kiliinikada waxayna yareyn kartaa kharashyada baaritaanka. CRISPR waa qalab wax ka beddelka hidda-wadaha oo aan kaliya ogaan karin oo aqoonsan karin bartilmaameedyada hidde-sideyaasha keena kansarka, laakiin sidoo kale waxaa loo isticmaali karaa in lagu saxo, lagu xakameeyo, iyo in si epigenetic ah wax looga beddelo oncogenes-ka unugyada aadanaha (Jadwalka 1) (Ahmed et al., 2021). Dhowr baaritaan oo CRISPR ah ayaa la sameeyay si loo raadiyo hiddo-sideyaal la xiriira xakamaynta burooyinka, oncogenes-ka, iyo iska caabbinta daawada. Isticmaalka CRISPR/Cas9 si loo saxo noocyada kala duwan ee TNBC oncogenes waxaa lagu muujiyay Jaantuska 2.
Jaantuska 2. Tafatirka hidda-wadaha ee noocyada kala duwan ee TNBC oncogenes iyadoo la adeegsanayo CRISPR/Cas9 taasoo keentay hoos u dhac ku yimaada koritaanka burooyinka iyo metastasis-ka. Oncogenes-kan waxaa ka mid ah CDK7, NAT1, UBR5, YTHDF2, ITGA9, CXCR4 iyo CXCR7, Crypto1, ROR1 iyo ST8SIA, kuwaas oo ku lug leh dhacdada iyo metastasis-ka TNBC.
Guuritaanka unugyada kansarka, duullaanka, iyo kala-guurka epithelial-mesenchymal (EMT) waxay la xiriiraan ITGA9. Daraasado hore ayaa muujiyay in ITGA9 uu yahay ciyaaryahan muhiim ah oo ku jira wadada Notch isla markaana uu door xiiso leh ka ciyaaro metastasis-ka rhabdomyosarcoma (Molist et al., 2020). Intaa waxaa dheer, ITGA9 waxaa la ogaaday inay si dhow ula xiriirto saadaasha bukaanka ee dhowr nooc oo burooyinka ah, oo ay ku jiraan kansarka naasaha (Wang Z. et al., 2019). Intaa waxaa dheer, falanqaynta bioinformatics ee ITGA9 waxay muujisay in muuqaalkeeda TNBC uu si weyn uga sarreeyay noocyada kale ee kansarka naasaha. Heerarka ITGA9 ee sare loo qaaday waxay la xiriiraan metastasis-ka burooyinka iyo dib u soo noqoshada bukaanada TNBC. Joojinta ITGA9 ee CRISPR/Cas9 waxay keentay sifooyin u eg unugyada asliga ah ee kansarka (CSC), angiogenesis-ka burooyinka, koritaanka burooyinka, iyo yareynta metastasis iyadoo kor u qaadaysa burburka β-catenin ee TNBC (Wang Z. et al., 2019).
Crypto-1 waa xubin ka tirsan qoyska TGF-β waana mid muhiim u ah embriyaha hore, dayactirka unugyada asliga ah, iyo metastasis-ka kansarka (Ishii et al., 2021). Sidoo kale loo yaqaan Tdgf-1, waa borotiin calaamadayn ah oo GPI-ku-xiran oo ku lug leh nidaaminta sameynta xariiqda hore, mesoderm iyo endoderm, iyo sidoo kale sameynta asymmetry bidix/midig ee horumarinta xubnaha jirka inta lagu jiro embriyaha (Zhang et al., 2021b). Intaa waxaa dheer, Cripto-1 waxaa la muujiyay inuu ku lug leeyahay kala-guurka epithelial-mesenchymal (EMT) oo ah calaamadda unugyada asliga ah (Zhang et al., 2021b). EMT muhiim uma aha oo kaliya hababka kala duwan sida horumarinta embriyaha, fibrosis iyo bogsashada nabarka, laakiin sidoo kale duullaanka kansarka iyo metastasis. Intaa waxaa dheer, Cripto-1 waxaa la muujiyay inuu la falgalo afar qaataha Notch oo uu xoojiyo bisaylkooda ka dib tarjumaadda (Brandstadter iyo Maillard, 2019). Wadada calaamadaynta Notch waxaa la ogyahay inay ku lug leedahay dayactirka unugyada kansarka naasaha ee aadanaha. Daraasaduhu waxay muujiyeen in garaaca CRISPR/Cas9 ee Crypto-1 uu joojiyo kobaca kansarka iyo metastasis-ka. Sidaa darteed, Crypto-1 waxay noqon kartaa bartilmaameed daaweyn oo muhiim ah oo loogu talagalay TNBC (Castro et al., 2015).
Borotiinka XCL12 iyo soo-dhoweeyaha chemokine-ka CXC (CXCR4 iyo CXCR7) waxay doorar kala duwan ka ciyaaraan faafitaanka unugyada kansarka, koritaanka, socdaalka iyo duullaanka (Wu et al., 2015). Soo-dhoweeyayaashan chemo-ka ah waxay la xiriireen horumarinta TNBC iyada oo loo marayo waddooyin badan oo calaamadayn ah oo ku jira moodooyinka in vivo iyo in vitro labadaba (Wu et al., 2015). Intaa waxaa dheer, kicinta CXCR4 iyo CXCR7 waxay la xiriirtaa u nuglaansho weyn oo ku timaadda metastasis iyo saadaalin liidata oo ku dhacda TNBC (Karn et al., 2022). Sidaa darteed, garaaca CXCR4 iyo CXCR7 waxay noqon karaan hiddo-wadeyaal bartilmaameed u ah daawada oo wax ku ool ah si loogu daaweeyo kansarka naasaha, oo ay ku jiraan TNBC. Daraasad ay sameeyeen Yang et al. Yang et al (2019) waxay isticmaaleen CRISPR/Cas9 si ay ula dagaallamaan hiddo-wadaha CXCR4 iyo CXCR7 waxayna ogaadeen in faafitaanka TNBC, koritaanka, socdaalka iyo duullaanka si weyn loo joojiyay (Yang et al., 2019).
Heerarka kordhay ee miR-3662, oo ah TNBC oncogene, ayaa lagu arkay unugyada kansarka naasaha (Yi et al., 2022). Burburinta miR-3662 ayaa la muujiyay inay joojiso koritaanka burooyinka kansarka naasaha iyo metastasis labadaba gudaha iyo gudaha jirka (Agarwal iyo Gupta, 2021). HBP-1 waa horjooge xooggan oo calaamadaynta Wnt/-catenin ah waxayna u badan tahay inay mas'uul ka tahay koritaanka miR-3662 ee unugyada TNBC. Dhawaan, Yi et al. waxay ogaadeen in dhidibka miR-3662-HBP1 uu nidaamiyo marinnada calaamadaynta Wnt/-catenin ee unugyada TNBC (Yi et al., 2022). Iyada oo ay ugu wacan tahay muujinta gaarka ah ee burooyinka, miR-3662 waxay noqon kartaa bartilmaameed daaweyn oo suurtagal ah oo loogu talagalay TNBC. Sidaa darteed, burburinta CRISPR/Cas9 ee miR-3662 waxay noqon kartaa hab aad u fiican oo lagu horumarinayo daawooyin cusub oo loogu talagalay daaweynta TNBC.
UBR5 waa borotiin nucleophosphorotein ah oo 300 kDa ah kaas oo loo aqoonsaday inuu yahay nidaamiye muhiim ah oo ku saabsan burooyinka, metastasis, iyo jawaab celinta difaaca jirka ee kansarrada kala duwan (Shearer et al., 2015; Fu et al., 2023). UBR5 waxaa la sheegay inuu si aad ah kor ugu kacay muunadaha TNBC wuxuuna kiciyaa shaqada ERα isagoo kicinaya kororka iyada oo loo marayo dhaqdhaqaaqa ubiquitin ligase (Bolt et al., 2015). Daraasadaha taxanaha exome ee dhammaan muunadaha TNBC ee aasaasiga ah ayaa sidoo kale muujiyay muujinta kordhaysa ee UBR5, taasoo soo jeedinaysa doorkeeda horumarinta TNBC. Intaa waxaa dheer, tirtirka CRISPR/Cas9 ee UBR5 wuxuu muujiyay xannibaad weyn oo ku saabsan metastasis-ka TNBC iyo kobaca moodooyinka tijaabada ah ee jiirka. Intaa waxaa dheer, ku darista UBR5 ee qaabka jiirka duurjoogta ah ayaa soo celisay shaqadeeda oo dhan, halka saameyntan aan lagu arag noocyada mutant-ka ee aan firfircoonayn (Liao et al., 2017). La'aanta UBR5 waxay la xiriirtaa kororka apoptosis, necrosis, iyo joojinta koritaanka burooyinka ee TNBC sababtoo ah angiogenesis liita. Sababtoo ah luminta UBR5, burooyinka ku faafa xubnaha fog ayaa yaraaday, UBR5-na waxay kicisaa EMT aan caadi ahayn inta badan iyadoo yareyneysa muujinta E-cadherin (Zhang iyo Weinberg, 2018). Dhawaan, UBR5 waxaa la muujiyay inay tahay arrin aad muhiim u ah qoraalka PDL1 ee IFN-γ ee TNBC sababtoo ah la'aanta dhaqdhaqaaqa ubiquitination E3. Falanqaynta qoraalka RNA waxay shaaca ka qaaday in UBR5 ay yeelan karto saameyn nidaamsan oo ku saabsan hiddo-wadaha la xiriira wadada IFN-γ waxayna kor u qaaddaa transactivation-ka PDL1 iyadoo kordhinaysa heerarka firfircoonida ee borotiinka kinase RNA (PKR) iyo transducers-kiisa iyo firfircoonayaasha. qoraalka 1 (STAT1) iyo qodobka sharciyeynta interferon 1 (IRF1). Si kastaba ha ahaatee, isku-darka CRISPR/Cas9 ee muujinta UBR5 iyo PD-L1 ee dhexdhexaadka ah wuxuu leeyahay saameyn daaweyn oo isku dhafan marka loo eego mid kasta oo ka mid ah xannibaadda oo keliya, iyadoo saameyn qoto dheer ku leh deegaanka burooyinka (Wu et al., 2022). Sidaa darteed, CRISPR/Cas9 waxay noqon kartaa qalab muhiim ah oo lagu joojiyo shaqada UBR5, taasoo joojinaysa metastasis-ka TNBC iyo koritaanka burooyinka.
ROR1 waa borotiin nooc I ah oo lagu muujiyo kansarka iyo horumarka uurjiifka waxaana loo aqoonsaday inuu yahay borotiin oncofetal ah (Nicholas Borcherding, 2014). Dhaqanka duullaanka ah ee kansarrada kala duwan ee aadanaha ayaa lala xiriiriyay kor u kaca ROR1. Natiijooyin rajo leh ayaa laga helay daraasadaha in vivo iyo in vitro oo ku lug leh isku-darka daaweynta ee bartilmaameedsanaya ROR1 (Chien et al., 2016). Heerarka sare ee ROR1 mRNA ee unugyada naasaha ayaa sidoo kale lala xiriiriyay burooyinka naasaha ee basal-ka u eg (BL) iyo u guuritaankooda qaybaha kale ee jirka. Intaa waxaa dheer, muujinta xad dhaafka ah ee ROR1 waxaa loo aqoonsaday inay tahay calaamad saadaalin ah oo loogu talagalay horumarinta TNBC (Chien et al., 2016). Si kastaba ha ahaatee, aamusinta ROR1 iyadoo la adeegsanayo CRISPR/Cas9 si loo xakameeyo koritaanka TNBC iyo metastasis waxay noqon doontaa istaraatiijiyad wax ku ool ah.
Habka sialylation-ka waxaa ku jira ku darista sialic acid glycoconjugates, kaas oo ay kiciso sialyltransferases (STs). ST8SIA1 waxay ka tirsan tahay qoyska ST waxayna door muhiim ah ka ciyaartaa cudurro kala duwan sida leukemia lymphocytic iyo kansarka mindhicirka (Chang et al., 2018). Falanqaynta taxanaha RNA waxay muujinaysaa in ST8SIA1 si weyn loogu muujiyo unugyada naasaha ee bukaanada TNBC isla markaana si togan loola xiriiriyo isbeddellada ku yimaada hidda-wadaha xakamaynta burooyinka p53, taas oo gacan ka geysan karta cudurka TNBC (Battula et al., 2017). Intaa waxaa dheer, ST8SIA1 waxay ku lug leedahay metastasis iyo soo noqoshada TNBC, taasoo soo jeedinaysa inay door muhiim ah ka ciyaarto dhacdada iyo horumarinta TNBC. Qaabka in vitro ee TNBC, jabinta ST8SIA1 ee CRIPSR/Cas9 ayaa la muujiyay inay xannibayso koritaanka iyo metastasis-ka (Battula et al., 2017). Tani waxay soo jeedinaysaa in CRISPR/Cas9 ay noqon karto qalab muhiim ah oo lagu joojinayo shaqada oncogene-ka ST8SIA1 ee daaweynta TNBC.
NAT1 waa ensaym dheef-shiid kiimikaad ah kaas oo kiciya sameynta isku-dhafka xenobiotic-ga wejiga II waxaana lagu muujiyaa ku dhawaad dhammaan unugyada aadanaha. NAT1 waxay isticmaali kartaa cofactor folate si ay u beegsato acetyl-CoA (acetyl-CoA) xitaa haddii aysan jirin substrate-ka amine-ka udgoonka leh (Stepp et al., 2015; Laurieri et al., 2014). Daraasaduhu waxay muujiyeen in NAT1 ay xakameyso shaqada matrix metalloproteinase 9 (MMP9) ee moodooyinka unugyada kansarka naasaha waxayna ka ilaalisaa noocyada oksijiinta ee falcelinta leh (ROS) inta lagu jiro gaajada gulukooska (Wang et al., 2018). Tirtiridda NAT1 ayaa la muujiyay inay joojiso isku-dhafka pyruvate dehydrogenase, taasoo horseedaysa cillad mitochondrial (Wang L. et al., 2019). Intaa waxaa dheer, warbixinno kale oo kala duwan ayaa muujiyay in joojinta NAT1 iyadoo la adeegsanayo molecules yar yar iyo aamusinta siRNA ay yareyn karto duullaanka iyo faafitaanka unugyada kansarka naasaha (Stepp et al., 2018). Dhawaan, CRISPR/Cas9 waxaa loo isticmaalay in lagu xakameeyo NAT1 ee khadka unugyada kansarka naasaha MDA-MB-231, taasoo saamaysay dheef-shiid kiimikaadka unugyada iyadoo ku xiran heerka muujinta. Daraasaddani waxay sidoo kale muujisay in NAT-1 ay muhiim u tahay horumarka iyo metastasis-ka TNBC (Carlisle et al., 2020).
Qoraalka isku-dubaridka ah ee oncogenes-ka waxaa nidaamiya kuwa kor u qaada, arrimaha qoraalka iyo kuwa isku-dubaridka ah (Hnisz et al., 2015). Intaa waxaa dheer, koox ka mid ah kinases-ka ku tiirsan cyclin-ka (CDKs), sida CDK7, CDK8, CDK9, CDK12, iyo CDK13, ayaa looga baahan yahay nidaaminta qoraalka. Kuwaas waxaa ka mid ah, CDK7 wuxuu ku lug leeyahay fosfooraska RNA polymerase II, kaas oo aad muhiim ugu ah bilowga iyo ballaarinta qoraalka oncogene ee pathogenesis-ka TNBC. Daraasad cilmiyeed, tirtirka CDK7 ee CRISPR/Cas9 wuxuu joojiyay TNBC, taasoo muujinaysa in pathogenesis-ka TNBC uu ku tiirsan yahay CDK7 (Wang Y. et al., 2015).
Daraasaduhu waxay muujiyeen in isbeddellada ku yimaada MYC iyo RBP (borotiinka isku xidha RNA) ay horseedi karaan apoptosis, halka isbeddellada hal hidde-side ee MYC ama RBP aysan saameyn ku yeelan koritaanka unugyada kansarka (Einstein et al., 2021). In ka badan 1000 RBPs oo ku jira hiddo-wadaha aadanaha ayaa la baaray iyadoo la adeegsanayo maktabad ku salaysan CRISPR/Cas9. Kuwaas waxaa ka mid ah, 57 RBPs ayaa la ogaaday inay muhiim u yihiin koritaanka unugyada kansarka oo leh heerarka MYC ee aadka u sarreeya (Wheeler et al., 2020). Intaa waxaa dheer, YTHDF2 waxay muhiim u tahay ilaalinta koritaanka unugyada TNBC waxayna yareysaa tirada qoraallada methylated inta lagu jiro qoraalka iyo turjumaadda heerka sare ee unugyada kansarka oo leh muujinta MYC oo sareysa. Intaa waxaa dheer, YTHDF2 lagama maarmaan uma aha unugyada kansarka, kuwaas oo aan ku tiirsanayn heerarka MYC ee sareeya si loo dheereeyo badbaadada bukaanada TNBC (Einstein et al., 2021), taasoo soo jeedinaysa inay noqon karto bartilmaameed daaweyn oo suurtagal ah oo loogu talagalay daawooyinka ka adkaan kara TNBC.
Borotiinnada faraha ee Zinc (ZNFs) waxay ka kooban yihiin qiyaastii 1% guud ahaan hiddo-wadaha aadanaha. Daraasaduhu waxay muujiyeen in ZNF ay nidaamin karto faafitaanka unugyada ee kansarrada kala duwan, sida kansarka beerka, kansarka naasaha iyo kansarka mindhicirka (Zhang W. et al., 2021; Li et al., 2017). Maktabadaha ay soo saarto CRISPR knockout ayaa loo isticmaalay in lagu baaro hiddo-wadeyaal kala duwan oo xakameynaya burooyinka (TSGs) ee unugyada kansarka naasaha (Shalem et al., 2014). Tan iyo markaas, daraasad transcriptomic ah oo lagu sameeyay unugyada kansarka naasaha ee la tirtiray ee CRISPR/Cas9 ZNF319 ayaa muujisay in ZNF319 uu yahay hiddo-wade xakameynaya burooyinka kaas oo yareeya faafitaanka kansarka naasaha sidaas darteedna uu ku lug leeyahay habab kala duwan oo calaamadayn ah iyo hawlo kale oo bayooloji ah (Wang L. et al., 2022).
Ferroptosis waa nooc ka mid ah dhimashada unugyada ee la barnaamijiyay oo ku xiran joogitaanka birta. Waxaa la ogyahay in horumarinta ferroptosis ay saameyn ku leedahay joogitaanka lipid peroxides. Intaa waxaa dheer, PKCβII ayaa la sheegay inay muujinayso peroxidation lipid peroxidation hore, kororka peroxidation lipid peroxidation-kana wuxuu la xiriiraa ferroptosis. Baaritaanka maktabadda CRISPR/Cas9-dhexdhexaadinta kinase inhibitors ayaa shaaca ka qaaday in PKCβII ay ku lug leedahay habka lipid peroxidation, taas oo muhiim u ah ferroptosis ee unugyada MDA-MB-231 (Zhang et al., 2022). Sidaa darteed, tani waxay soo jeedinaysaa in garaaca PKCβII ee CRISPR/Cas9 ay noqon karto bartilmaameedka hidda-wadaha xakamaynta burooyinka ee daaweynta cudurrada la xiriira ferroptosis (Zhang et al., 2022).
Iska caabbinta daroogada ayaa la rumeysan yahay inay mas'uul ka tahay qiyaastii 90% dhimashada bukaanada kansarka waana mid ka mid ah caqabadaha ugu waaweyn ee daaweynta kansarka (Bukowski et al., 2020). Natiijooyinka waxay muujinayaan in tiro ku filan oo hiddo-sideyaal ah oo la xiriira qulqulka daawada, dayactirka DNA-da, apoptosis iyo dariiqyo kala duwan oo calaamadaynta unugyada ah ay la xiriiraan iska caabbinta daawada (Haider et al., 2020). Kuwaas ka mid ah, dhowr hiddo-side ayaa lagu bartilmaameedsaday qalabka CRISPR/Cas9 waxayna muujiyeen natiijooyin rajo leh oo lagu yareynayo iska caabbinta daawada iyo kordhinta waxtarka daaweynta ka hortagga kansarka (Vaghari-Tabari et al., 2022). Intaa waxaa dheer, maktabadaha baaritaanka hidde-sideyaasha CRISPR/Cas9 ee awoodda sare leh ayaa lagu lug lahaa wax ka beddelka shaqada bartilmaameedyada hidde-sideyaasha iska caabbinta daawada ee suurtagalka ah (Shalem et al., 2015). Si loo aqoonsado hiddo-sideyaasha iska caabbinta paclitaxel, taxanaha RNA oo ay weheliso baaritaanka maktabadda sgRNA ee genome-wide ayaa loo isticmaalay in lagu aqoonsado siddeed hiddo-side oo musharrax ah, oo ay ku jiraan histone deacetylase 9 (HDAC9), kuwaas oo la xiriira iska caabbinta daawada ee bukaanada qaba TNBC soo noqnoqda (B et al., 2020).). Daraasad kale, kororka muujinta diserine/threonine iyo tyrosine protein kinase (DSTYK) ayaa la arkay intii lagu jiray badbaadada bukaanada TNBC ee lagu daweeyay daawooyinka ka hortagga kansarka. Intaa waxaa dheer, hoos u dhaca CRISPR/Cas9 ee DSTYK ayaa si weyn u xoojiyay apoptosis-ka unugyada kansarka ee daawada u adkaysta ee ku jira vitro (unugyada SUM102PT iyo unugyada MDA-MB-468) iyo qaabka TNBC ee in vivo (Ogbu et al., 2021).
In kasta oo TNBC ay leedahay firfircooni aan caadi ahayn oo ku saabsan dariiqa MAPK, haddana saameynta caafimaad ee daaweynta bartilmaameedsan ee MEK waa mid liidata. Shaashad maktabad genomic ah oo CRISPR/Cas9 ah ayaa shaaca ka qaaday in joojinta PSMG2 (chaperone 2 oo ah isku-darka proteome-ka) ay dareensiiso unugyada TNBC BT549 iyo MB468 ee ka hortagga MEK AZD6244. CRISPR/Cas9 oo hoos u dhacday PSMG2 ayaa beddeshay shaqada caadiga ah ee proteasome, taasoo keentay kala-goynta autophagy ee PDPK1, taasoo sii wanaajinaysa unugyada burooyinka ee moodooyinka jiirka TNBC oo ay kiciyeen AZD6244 (MEK inhibitor) iyo MG132 (proteasome inhibitor). Sidaa darteed, daawooyinka proteasome iyo MAP kinase (MEK) ayaa si isku mid ah loo maamuli karaa si loo yareeyo faafitaanka unugyada burooyinka (Wang X. et al., 2022).
CRISPR/Cas9 ayaa sidoo kale loo isticmaalay in lagu baaro lumitaanka shaqada hiddaha taasoo horseedaysa iska caabbinta TNBC (Shu et al., 2020). Ge et al waxay sharraxeen habka iska caabbinta daawada ee unugyada kansarka ee lagu daweeyay JQ1, oo ah BET bromodomain inhibitor (BBDI), ee TNBC. Iyagoo adeegsanaya CRISPR/Cas9, waxay ogaadeen in tirtirka hidda-wadaha rb1 uu sababay in TNBC ay noqoto mid u adkaysata daawada ka hortagga kansarka JQ1. Sidaa darteed, shaqada rb1 waa muhiim marka laga jawaabayo daawooyinka JQ1 ee TNBC. Waxay sidoo kale sheegeen in paclitaxel uu yahay daawada CDK4/6 kinase/microtubule inhibitor, isku-darka BBDI-yada sida JQ1 waxay bixin karaan jawaabo daaweyn oo rajo leh oo ku saabsan TNBC-da daawada u adkaysata (Ge et al., 2020).
Muuqaalka qoraalka ee RNA-da dheer ee aan codeyn (lncRNA) ayaa la sheegay inay mas'uul ka tahay iska caabbinta daaweynta neoadjuvant ee TNBC. Daraasaddani waxay muujinaysaa in shan qoraal oo kala duwan oo MALAT1 lncRNA ah si weyn loogu muujiyey TNBC. Intaa waxaa dheer, tirtirka MALAT1 ee CRISPR/Cas9 ee dhexdhexaadinta ah ayaa kordhiyay xasaasiyadda unugyada TNBC BT-549 ee paclitaxel iyo doxorubicin, taasoo soo jeedinaysa door suurtagal ah oo iska caabbinta MALAT1 ee TNBC (Shaath et al., 2021).
Isbeddellada ku yimaada BRCA1 (BRCA1m) waa kuwo kala duwan sidaa darteedna way adag tahay in la ogaado. Bartilmaameedka PARP1 (poly(ADP-ribose) polymerase), oo ah lammaanaha dilaaga ah ee macmalka ah ee BRCA1, ayaa kordhin kara xasaasiyadda kiimikada ee daawada TNBC. Isticmaalka CRISPR/Cas9, tirtirka PARP1 wuxuu kordhiyay xasaasiyadda daawooyinka ka hortagga kansarka sida doxorubicin, gemcitabine iyo docetaxel ee unugyada TNBC ee mutant mBRCA1, taasoo soo jeedinaysa in PARP1 uu sidoo kale ku lug leeyahay iska caabbinta daawada ee TNBC (Vaghari-Tabari et al., 2022). Isbeddellada ku yimaada hiddo-wadaha xakamaynta burooyinka BRCA1 ama BRCA2 ayaa la ogyahay inay kordhiyaan suurtagalnimada in kansarka naasaha uu ku dhaco dadka. Daaweynta bukaanadan waxay u baahan tahay isticmaalka daawooyinka ka hortagga PARP. Intaa waxaa dheer, waxaa la muujiyay in garaaca nucleotide-ka ee DNPH1 iyadoo la adeegsanayo CRISPR/Cas9 ay ka saari karto sunta nucleotide 5-hydroxymethyldeoxyuridine (hmdU) monophosphate, taasoo kor u qaadaysa jawaabta unugyada aan BRCA ka yarayn ee xasaasiyadda ku leh daawooyinka PARP (Fugger). et al., 2021). Sidaa darteed, daawooyinka CRISPR/Cas9 iyo PARP1 waxay noqon karaan istaraatiijiyad daaweyn oo muhiim ah oo loogu talagalay TNBC.
Hidde-sidayaasha glycoprotein-ka ee soo galaya (P-gp) waa hiddo-side iska caabbinta daawooyinka badan oo guud ahaan kor loo qaaday qiyaastii 41% dhammaan TNBC (Sun et al., 2020). Soo-baxa daawada ee uu keeno P-gp ayaa loo aqoonsaday inay tahay hab-maamule muhiim ah oo ka hortagga daawada ee kansarka naasaha. Daawooyinka joojiya P-gp waxay muujiyeen xasaasiyad kordhay oo ku aaddan daawooyinka ka hortagga kansarka ee kansarka naasaha (Famta et al., 2021). Sidaa darteed, joojinta ama xakamaynta daawooyinka ka hortagga P-gp iyo P-gp ee ay dhexdhexaadisay CRISPR/Cas9 waxay noqon karaan habab aad muhiim u ah si looga gudbo iska caabbinta daawada ee TNBC.
G2 (ABCG2) oo qaada cajaladaha ATP-ku-xidha ayaa la og yahay inuu sababo iska caabinta daawada ee TNBC (Palasuberniam et al., 2015), inkastoo aysan jirin warbixino ku saabsan xiriirka ka dhexeeya aamusinta CRISPR/Cas9 iyo ABCG2 iyo joojinta hidda-wadaha burooyinka. PTEN waxay kor u qaadi kartaa kicinta ABCG2 (Palasuberniam et al., 2015), (Deepak Singh et al., 2021). Sidaa darteed, isticmaalka CRISP/Ca9 si looga saaro ABCG2 iyo isku darka daawada ABCG2 waxay noqon kartaa daaweyn ku habboon si looga gudbo iska caabinta daawada ee TNBC. Shaxda 2 waxay xustay CRISPR/Cas9 oo bartilmaameedsanaya dhammaan hiddo-wadaha iska caabinta.
Shaxda 2. CRISPR/Cas9 waxay bartilmaameedsataa hiddo-sideyaal iska caabbinta TNBC kala duwan si ay unugyada ugu dareensiiyaan daawooyinka ka hortagga kansarka.
Maktabadaha CRISPR/Cas9 waa qalab suurtagal ah oo lagu baaro isbeddellada hidda-wadaha ee la xiriira cudurka kansarka (Chan et al., 2022). Habkan baaritaanka wuxuu ku lug leeyahay afar tallaabo sida (a) dhismaha maktabadda, (b) gudbinta lentiviral, (c) baaritaanka phenotypic, iyo (d) falanqaynta hidda-wadaha bartilmaameedka ah. Inkasta oo TNBC ay leedahay firfircooni aan caadi ahayn oo ku saabsan waddada MAPK, saadaasha caafimaad ee daaweynta bartilmaameedka MEK ee bukaanada TNBC ee sida isbeddellada hidda-wadaha ee burooyinka sida PTEN, RB1, iyo TP53 aad bay u liidataa.
Intaa waxaa dheer, shaashad hidde-side ah oo adeegsanaysa CRISPR/Cas9 ayaa tijaabisay molecule-ka ugu awoodda badan uguna xulashada badan, dehydrocatrol, kaas oo ku badan ubaxyada iyo soosaarka caleenta Guatemala, si loo fahmo saameynta dehydrocatrol ee MDA-MB-231. Hababka sunta unugyada ee xulashada. Astaamaha jiritaan ee Mesenchymal ee noocyada hoose ee TNBC. Shaashadan ku salaysan CRISPR/Cas9 ayaa sidoo kale shaaca ka qaaday in HSD17B11, oo ah hiddo-side codeeya nooca 17β-hydroxysteroid dehydrogenase 11, si aad ah loogu muujiyo unugyada MDA-MB-231 waxayna keentaa dehydrofalcarinol gaar ah oo loogu talagalay unugyada MDA-MB-231 (Grant et. al., 2020). Sidaa darteed, tani waxay soo jeedinaysaa in baaritaanka hiddo-side ee CRISPR/Cas9 uu leeyahay awood weyn oo lagu aqoonsanayo hababka salka ku haya sifooyinka ka hortagga kansarka ee isku-dhafka dabiiciga ah ee suurtagalka ah.
Intaa waxaa dheer, nuglaanta TNBC ee kansarka ayaa lagu bartay iyadoo la adeegsanayo shaashad CRISPR/Cas9 ah oo aan eex lahayn oo ku jirta hidde-sideyaasha oo dhan, taasoo muujisay xiriir ka dhexeeya marinnada xakamaynta kansarka iyo kuwa keena burooyinka. Qaybaha muhiimka ah ee marinnada mTOR iyo Hippo ayaa la sheegay inay door muhiim ah ka ciyaaraan nidaaminta burooyinka ee TNBC. Intaa waxaa dheer, daraasaduhu waxay muujiyeen in joojinta daawada ee mTORC1/2 iyo YAP oncoprotein ay si wax ku ool ah u joojiso cudurka TNBC iyadoo la adeegsanayo qaabka isku-dhafka daawada ee in vitro iyo xenografts-ka laga helo bukaanka ee in vivo. Intaa waxaa dheer, joojinta mTORC1/2 ee Torin-1-dhexdhexaadinaysa waxay xoojisaa macropinocytosis, halka joojinta YAP ee verteporfin ay keento dhimashada unugyada TNBC. Marka la isku daro, natiijooyinkani waxay muujinayaan awoodda iyo adkeysiga baaritaanka hidde-sideyaasha ee in vivo CRISPR si loo aqoonsado daaweyn cusub oo wax ku ool ah oo loogu talagalay TNBC (Dai et al., 2021).
Nidaam xumada nidaamka difaaca jirka waa arrin muhiim u ah burooyinka. Unugyada kansarku waxay ka baxsadaan nadiifinta difaaca jirka iyagoo ka gudbaya hababka difaaca jirka, oo ay ku jiraan faragelinta dhaqdhaqaaqa unugyada difaaca jirka ee deegaanka burooyinka iyo wax u dhimidda nidaamka difaaca jirka. Sidaa darteed, horumarinta nidaamka difaaca jirka oo la hagaajiyay waxay noqon kartaa hab muhiim ah oo lagula dagaallamo burooyinka. Isticmaalka wax ka beddelka hidda-wadaha ee ku salaysan CRISPR/Cas9 wuxuu wax ka qabanayaa dhowr arrimood oo la xiriira cilladda difaaca jirka marka laga eego dhinacyo kala duwan. CRISPR/Cas9 waxaa loo isticmaalay in lagu horumariyo difaaca jirka ee ka hortagga burooyinka kansarka naasaha iyada oo loo marayo waddooyinka soo socda (Jaantuska 3).
Jaantuska 3. Daaweynta difaaca jirka ee CRISPR/Cas9 waxay bartilmaameedsataa unugyada TNBC. Lumitaanka CDK5 iyo hoos u dhaca PDL1 iyo CD155 waxay xoojisaa habdhiska difaaca jirka. Sidoo kale, luminta A2AR iyo hoos u dhaca TAAs sida HER2, mucin 1 iyo TEM8 waxay kordhisay waxtarka unugyada CAR-T ee dila unugyada kansarka. Baaritaanka unugyada T ee CRISPR/Cas9 uu wado ayaa muujiyay in carqaladeynta kinase p38 ay kor u qaaddo dhaqdhaqaaqa ka hortagga burooyinka unugyada T. Unugyada T ee wax laga beddelay CRISPR/Cas9 waxay kordhiyaan muujinta TCR (Qabsadaha unugyada T), taasoo keentay in unugyada T ay yeeshaan dhaqdhaqaaq ka hortagga burooyinka.
Hadafka daaweynta difaaca jirka waa in la kiciyo habdhiska difaaca jirka si uu u weeraro unugyada kansarka. Soo-jiidashada xad-dhaafka ah ee borotiinada baaritaanka difaaca jirka ayaa badanaa ka hortagaya falcelinta isdifaaca jirka laakiin waxay ka caawin kartaa kansarrada inay ka fogaadaan (Topalian et al., 2015). Borotiinnadani waxay ka hortagaan falcelinta difaaca jirka iyagoo ku xiraya soo-dhoweeyayaasha dusha sare ee unugyada difaaca jirka. Borotiinno badan oo baaritaanka ah (sida CD155 iyo PD-L1) waxay bartilmaameedsadaan soo-dhoweeyaha PD-1 ee unugyada difaaca jirka waxaana lagu muujiyaa kansarka naasaha, gaar ahaan TNBC (Li Y.-C. et al., 2020). Joojinta PD-L1 ama soo-dhoweeyaha iyada oo la adeegsanayo CRISPR/Cas9 waxay kicin kartaa habdhiska difaaca jirka si uu u weeraro burooyinka TNBC (Yahata et al., 2019). Intaa waxaa dheer, hoos u dhaca muujinta PD-L1 iyada oo loo marayo tirtirka CRISPR/Cas9 ee CDK5 ayaa la muujiyay inay joojiso koritaanka burooyinka in vitro iyo in vivo (Deng et al., 2020). Moodooyinka kansarka naasaha ee ku jira gudaha iyo gudaha jirka ayaa soo jeedinaya in hoos u dhaca CD155 ee uu dhexdhexaadiyo shRNA ay saameyn daaweyn ah ku yeelan karto kansarka naasaha (Gao et al., 2018).
Unugyada CAR T waxay muujiyaan CAR-yada aqoonsada antigen-yada la xiriira burooyinka (TAAs) waxayna isticmaali karaan burburinta borotiinnada baaritaanka si ay u xoojiyaan dhaqdhaqaaqooda (Li C. et al., 2020). Waxaa jira bartilmaameedyo kala duwan oo suurtagal ah oo loogu talagalay daaweynta unugyada CAR T ee kansarka naasaha, oo ay ku jiraan dhowr TAA sida HER2, mucin1, iyo TEM8 (Bajgain et al., 2018). Waxaa jira caddayn ah in unugyada CAR T ee beegsanaya mesothelin (oo si xad dhaaf ah loogu muujiyo unugyada TNBC BT-459) ay aad waxtar ugu leeyihiin kansarka marka PD-1 laga saaro iyadoo la adeegsanayo CRISPR/Cas9 (Hu et al., 2019). Si kastaba ha ahaatee, kala soocidda unugyada T ee bukaanada ka dibna sixitaanka ex vivo waa geedi socod shaqo badan oo waqti badan qaata. In kasta oo unugyada T ee caalamiga ah ay yareyn karaan shuruudaha go'doominta, unugyada T ee deeq-bixiyeyaasha ee muujiya antigen-ka leukocyte-ka aadanaha (HLA) fasalka I iyo qaataha unugyada T (TCR) waa in laga saaraa si looga hortago cilladaha is-beddelka ee is-beddelka ah (Ren et al., 2017). , 2017a). Iyada oo la adeegsanayo CRISPR/Cas9, HDR waxay isku mar baabi'in kartaa TCR iyo HLA waxayna baabi'in kartaa hidda-wadaha ku jira CAR. Daraasaduhu waxay muujiyeen in CRISPR/Cas9 loo isticmaali karo in lagu soo bandhigo CAR-yada ka hortagga CD19 goobta TCR, taasoo si wax ku ool ah u soo saarta CAR-yada iyada oo aan la dhimin unugyada T (Dimitri et al., 2022). Tiknoolajiyada Multiplex ayaa la sameeyay si loo soo saaro unugyada CAR T ee allogeneic iyadoo isla mar ahaantaas la tirtirayo TCR, beta-2-microglobulin (B2M), qaybta HLA-I iyo borotiinnada kale sida PD-1 iyo CTLA-4, kuwaas oo laga yaabo inay leeyihiin sifooyin ka hortagga kansarka oo weyn. marka loo eego TNBC (Eyquem et al., 2017; Liu et al., 2017; Ren et al., 2017b; Dimitri et al., 2022).
Isticmaalka CRISPR/Cas9 wuxuu hagaajin karaa waxtarka unugyada CAR-T. Adenosine waxaa loo yaqaanaa inuu leeyahay sifooyin difaac oo yareeya difaaca kansarka iyadoo la xannibayo shaqada unugyada T iyo kicinta adenosine A2A receptors (A2AR) (Vigano et al., 2019). Aamusiinta A2AR iyadoo la isticmaalayo CRISPR/Cas9 waxay si weyn u wanaajisay waxtarka unugyada CAR-T ee ku jira jirka (Giuffrida et al., 2021). Unugyada T waxaa loo yaqaanaa inay muujiyaan astaamo kala duwan oo phenotypic ah sida ballaarinta unugyada, kala soocidda, walbahaarka oksaydhka iyo walbahaarka genomic. Baaritaanka unugyada T ee ku salaysan CRISPR/Cas9 wuxuu muujiyay carqaladeyn 25 kinases oo kala duwan oo receptor cell ah. Kuwaas waxaa ka mid ah, tirtirka p38 kinase ayaa la muujiyay inuu kor u qaado dhaqdhaqaaqa ka hortagga burooyinka ee unugyada T, taasoo muujinaysa in p38 kinase uu yahay nidaamiye muhiim ah oo ka tirsan nidaaminta unugyada CAR-T (Gurusamy et al., 2020).
Unugyada T-ga waxaa lagu beddeli karaa hidde ahaan iyadoo la adeegsanayo CRISPR/Cas9 si loo soo saaro TCR-yo aad u muuqda. U wareejinta unugyada T-ga ee hidde ahaan wax laga beddelay bukaanada waxay muujisay firfircooni ka hortagta kansarka oo ka xoog badan unugyada T-ga ee hidde ahaan wax laga beddelay. Sidaa darteed, TCR-yada hidde ahaan wax laga beddelay waxay la tartami karaan TCR-yada hidde ahaan wax laga beddelay bukaanada, taasoo saameyn karta suurtagalnimada daaweynta difaaca jirka ee kansarka. Si looga gudbo dhibaatadan, isticmaalka CRISPR/Cas9 si looga saaro TCR-β ee hidde ahaan wax laga beddelay unugyada qaataha ka dibna loo wareejiyo unugyada TCR-β bukaanada kansarka waxay muujin kartaa jawaabo difaac oo ka wanaagsan kansarka iyada oo aan loo baahnayn tartan galmo oo TCR ah oo hidde ahaan wax laga beddelay (Fan et al. 2018). Sidaa darteed, marka laga reebo unugyada T-ga ee wax laga beddelay CRISPR, TCR-yadu waxay kun jeer ka nugul yihiin antigens-ka burooyinka marka loo eego unugyada T-ga ee caadiga ah ee TCR-ku soo saaray. Intaa waxaa dheer, leukemia-yada kala duwan, unugyada T-ga ee wax laga beddelay ee ay soo saaraan γδ TCR+ CRISPR waxay muujiyaan muujinta sare ee unugyada T-ga CD4+ iyo CD8+ marka loo eego wareejinta TCR-ga caadiga ah (Legut et al., 2018). Sidaa darteed, unugyada T ee wax laga beddelay ee ay soo saarto CRISPR/Cas9 waxay noqon karaan hab wax ku ool ah oo lagu daweeyo difaaca jirka si looga gudbo TNBC.
Integrins waa molecules isku dheggan oo ku jira unugyada unugyada ee unugyada isku xira waxayna kor u qaadaan isku xidhka unugyada ee unugyada isku xiran (ECM) (Hamidi iyo Ivaska, 2018). Kala-goynta integrins-ka waxay la xiriirtaa horumarka kansarka iyo socdaalka iyadoo la beddelayo matrix-ka unugyada ka baxsan, taasoo horseedaysa badbaadada unugyada kansarka ee wareegga dhiigga (Hamidi iyo Ivaska, 2018). Kala-goynta integrins-ka ee CRISPR/Cas9-dhexdhexaadka ah waxay hoos u dhigtaa horumarka burooyinka, metastasis-ka, iyo gumeysiga TNBC. Kala-goynta integrin a5 (ITGA5) ayaa la soo sheegay inay yareyso socdaalka unugyada iyo horumarka kansarrada kale sida kansarka sambabada (Ju et al., 2017), taasoo soo jeedinaysa in integrin a5 ay sidoo kale noqon karto qodob muhiim ah oo ku saabsan cudurka TNBC.
Abuurista jiirarka knockout-ka iyadoo la adeegsanayo hababka unugyada ee jirridda embriyaha (ES) ee dhaqameed waa geedi socod shaqo badan, waqti badan qaata, oo aan waxtar lahayn. Waxay qaadataa bilo iyo sannado in la beegsado unugyada ES iyada oo loo marayo isku-darka isku-dhafan, la tarmo jiirarka chimeric, ka dibna lagu dhex daro jiirarka heterozygous si loo soo saaro farcan homozygous ah. Taranka isku-dhafka ah ayaa loo baahan yahay si loo abuuro jiirar leh isbeddello hidde oo badan. Si kastaba ha ahaatee, dhibaatooyin badan ayaa soo ifbaxay marka la isticmaalayo jiirarka oo ay ka dhalatay kala-goynta unugyada ES iyadoo la adeegsanayo CRISPR/Cas9 ama iyadoo lagu durayo qaybaha CRISPR/Cas9 ukunta hal unug ee la bacrimiyey. Tusaale ahaan, soo bandhigidda isbeddellada badanaa waxay ka dhacdaa meelaha biallelic mana aha mid gaar u ah hidda-wadaha. Dhawaan ayaa la soo sheegay in unugyada ES ee isticmaalaya tignoolajiyada CRISPR/Cas9 ay isku mar gelin karaan isbeddellada biallelic ilaa 5 hiddo-wade (Nishizono et al., 2021). Ujeeddadaas awgeed, Cas9 mRNA iyo shan gRNA-ga gaarka u ah hidda-wadaha ayaa isku mar lagu wareejiyay unugyada ES. Tani waxay iftiiminaysaa ballanqaadka iyo waxtarka habkan, inkastoo isbeddelladan laga yaabo in la gudbiyay markii khadadka aasaasaha la soo saaray si loo soo saaro jiirarka shan-jibbaaran ee garaaca wadnaha. Daraasaddu waxay sidoo kale sheegaysaa daahfur la yaab leh: Unugyada ES looma baahna inay abuuraan jiirar hidde ahaan wax laga beddelay. Taa beddelkeeda, si looga saaro alaabada hidda-wadaha gaarka ah, Cas9 mRNA iyo gRNA ayaa lagu duray embriyaha marxaladda hal-unug. Natiijo ahaan, khadadka aasaasayaasha garaaca wadnaha ayaa la sameeyay kuwaas oo aragti ahaan loo isticmaali karo in lagu barto cawaaqibka ka dhasha tirtirka hidda-wadaha ee jiirarka (Qin et al., 2016). Sidaa darteed, CRISPR/Cas9 waxay u oggolaanaysaa abuurista jiirarka transgenic si loogu daaweeyo TNBC qiimo ka hooseeya injineernimada hidda-wadaha dhaqameed. Iyada oo la adeegsanayo nidaamka CRISPR/Cas, qaab cusub oo jiirka garaaca wadnaha ah ayaa la sameeyay kaas oo si guul leh u soo bandhigi kara isbeddellada dhibcaha hal ama in ka badan hiddo-wadaha endogenous ee TNBC. Iyada oo ku saleysan fikraddan, moodooyinka xayawaanka ee TNBC ayaa sidoo kale lagu samayn karaa iyadoo la adeegsanayo tirtirka BRCA1 iyo p53 ee CRISPR/Cas9 oo dhexdhexaadin ah, taasoo keenta luminta hagaajinta HR, xasillooni darrada hidde-sideyaasha, iyo noocyada isbeddelka isbeddelka (Annunziato et al., 2020).
Hadda, habab kala duwan sida sawirka naasaha, sawirka magnetic resonance imaging (MRI) iyo ultrasound ayaa loo isticmaalaa in lagu ogaado TNBC. Si kastaba ha ahaatee, hababkani waxay leeyihiin xaddidaadyo. Baaritaanka naasaha waxaa loo isticmaalaa in lagu ogaado unugyada naasaha ee maxalliga ah halkii laga ogaan lahaa metastases, halkaas oo unugyada kansarku ay u guureen xubnaha kale. Baaritaanka Ultrasonography ma aha hab lagu kalsoonaan karo oo lagu ogaan karo TNBC (Chen iyo Lee-Felker, 2023). MRI wuxuu leeyahay xasaasiyad ka sarreysa ultrasound iyo mammography, laakiin saxnaantiisa ogaanshaha waa xaddidan tahay (Sha iyo Chen, 2022). Baaritaanka unugyada waa hab duullaan ah oo lagu aqoonsado unugyada kansarka. Si kastaba ha ahaatee, xaaladaha qaarkood, baaritaanka unugyada kansarka ayaa laga yaabaa inuu seego unugyada kansarka haddii irbaddu ka leexato meesha xiisaha leh. Intaa waxaa dheer, waa mid aad qaali u ah waxayna u noqon kartaa mid naxdin leh bukaanka. TNBC waa nooc kansar ah oo kala duwan, sidaa darteed baaritaanka unugyada kansarka waxaa laga yaabaa inaanu bixin macluumaad ku filan oo ku saabsan nooca kansarka. Sidaa darteed, hab cusub oo lagu kalsoonaan karo oo lagu ogaan karo TNBC ayaa si degdeg ah loogu baahan yahay. CRISPR/Cas9 waxay u adeegi kartaa beddel aad u xasaasi ah oo yar oo loogu talagalay ogaanshaha kansarka naasaha. Si taas loo gaaro, istaraatiijiyadaha ku salaysan CRISPR/Cas9 ayaa loo isticmaali karaa in lagu horumariyo hababka PCR ee lagu ogaanayo TNBC. Marka hore, borotiinnada Cas9 iyo cpf1 ee nidaamka CRISPR waxaa loo isticmaalaa in lagu saaro DNA-da aan gaarka ahayn, ka dibna labadan borotiin (Cas9 iyo cpf1) waxay aqoonsan karaan taxanaha PAM ka hor inta aysan ku xidhmin DNA-da bartilmaameedka ah (Deepak Singh et al., 2021). . Sidaas darteed, PCR waxay aqoonsan kartaa isbeddellada la xiriira horumarinta kansarka. Dhowr daraasadood ayaa qaatay istaraatiijiyaddan ku salaysan CRISPR si loo ogaado isbeddellada kala duwan ee kansarrada kala duwan (Safari et al., 2019). Sidaa darteed, hababka PCR ee ku salaysan CRISPR waxay yareyn karaan ku tiirsanaanta ogaanshaha TNBC ee hababka duullaanka ah sida immunohistochemistry-ka ku salaysan biopsy.
Isbeddellada hidde-sideyaasha ee nidaaminta soo-dhoweeyaha hoormoonka ayaa sidoo kale lagu muujiyay TNBC (Chen iyo Russo, 2009). Istaraatiijiyadaha PCR ee ku salaysan CRISPR/Cas9 oo adeegsanaya microarrays si loo ogaado baaritaanka goobta daryeelka ayaa si wax ku ool ah ula socon kara isbeddelladan (Hajian et al., 2019). Waxay sidoo kale siin kartaa bixiyeyaasha daryeelka caafimaadka macluumaad khuseeya oo ku saabsan isbeddellada gaarka ah ee bukaanada TNBC, taas oo gacan ka geysan karta hagaajinta koorsada daaweynta. Si kastaba ha ahaatee, farsamadan isku dhafan waxay leedahay xaddidaadyo. Sidaa darteed, dadaallo cilmi-baaris oo ballaaran ayaa loo baahan yahay ka hor inta aan habkan CRISPR/Cas-PCR loo isticmaali karin daryeelka caafimaadka si loo ogaado TNBC (Yang et al., 2019).
Waqtiga boostada: Oktoobar-14-2024